尿酸(Uric Acid, UA)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
微量法 100T/96S
注 意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
UA 是鳥類和爬行類動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。此外,UA 還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中 UA 升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化,相反 UA 降低會(huì)引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。
測(cè)定原理:
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2 及 H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,F(xiàn)e3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,測(cè)定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值,可計(jì)算尿酸的含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
緩沖液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:
A:用于標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 緩沖液溶解。
B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 緩沖液溶解。
試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。
樣品的制備:
1. 動(dòng)植物組織:建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水,進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2. 血清,培養(yǎng)液:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm。
2、 操作表
標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | 測(cè)定管 | |
試劑一(μL) | A, 60 | B, 60 | A, 60 |
H2O(μL) | 180 | 240 | 180 |
試劑二(μL) | 60 | ||
樣品(μL) | 60 | ||
混勻,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,測(cè)定 505nm 處各管吸光值,標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管。
UV 含量計(jì)算公式:
1. 組織:
(1)按樣本重量計(jì)算
尿酸含量(μmol/g 鮮重)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(W÷V樣總)=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算
尿酸含量(μmol/mg prot)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ Cpr =0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr
尿酸(μmol/L)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×103 =500×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度 0.5μmol/mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:
樣本蛋白濃度,mg/mL;103 :1μmol/ L=103μmol/ mL
注意事項(xiàng):
1. 血清樣本請(qǐng)?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)測(cè)定,或者 4℃密封避光保存不超過(guò) 72 小時(shí)。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. z低檢出限為 10μmol/L。
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