簡(jiǎn)要描述:共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP),采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
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分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 貨號(hào) | YLK-0039D |
規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
測(cè)試方法: | 微量法、可見(jiàn)分光光度法 |
共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/48樣
注 意:正式測(cè)定前取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是許多高等植物細(xì)胞壁中含量Z豐富的多糖成分,其du特的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),通過(guò)不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,如水溶性果膠(WSP)、離子結(jié)合型果膠(ISP)和共價(jià)結(jié)合果膠(CSP)。
測(cè)定原理:
利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP),采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL× 1瓶,4℃保存。
試劑二:液體100mL× 1瓶,4℃保存。
試劑三:標(biāo)準(zhǔn)液1mL× 1支,4℃保存。
試劑四:液體5mL× 1瓶,4℃保存;
樣品的前處理:
1、 細(xì)胞壁的提取:取約0.3g樣本,加入1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,95℃水浴20min,冷卻至室溫,4000g 25℃離心10min,棄上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(渦旋振蕩2min左右,4000g 25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細(xì)胞壁,加入1mL試劑一(去除淀粉)浸泡15小時(shí),4000g 25℃離心10min,棄上清,將沉淀干燥,稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)。
2、 CSP的提?。?/span>稱取烘干的CWM 3mg,加入1mL試劑二,充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬,可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿,或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm處,蒸餾水調(diào)零;試劑三和試劑四37℃預(yù)熱10min以上;
2、操作表:
試劑名稱(µL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
待測(cè)樣本 | 50 | 50 | ||
試劑三 | 50 | |||
蒸餾水 | 50 | 50 | ||
試劑四 | 50 | 50 | 50 |
混勻
濃硫酸 | 400 | 400 | 400 | 400 |
混勻,95℃水浴5min后,冷卻至室溫,取200µL 至微量石英比色皿或96孔板中,530nm處讀取吸光值,空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2,需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋(可稀釋10倍或20倍)。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管,每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
CSP含量計(jì)算:CSP含量(mg /g 干重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05mg/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL; W:樣本干重,g。
注意:Z低檢測(cè)限為50μg /g 干重
共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒僅供科研!
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